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Autres techniques d'isolement de vésicules extracellulaires

     

Processus Global d’Analyse des Exosomes

 Généralités

EXCILONE offre une expertise dans l’isolement des Exosomes et des vésicules extracellulaires (VEs), leur caractérisation et l'analyse de leur contenu en ADN, ARN et protéines.

  • Purification des vésicules extracellulaires et ses sub-populations
  • Validation par la microscopie électronique en transmission (MET) en coloration négative (acétate d’uranyle) du point de vue morphologique et morphométrique
  • Distribution de taille et concentration des VEs
  • Détermination de la concentration protéique
  • Validation de préparations avec marqueurs protéiques spécifiques des VEs/exosomes en Western blot et ELISA
  • Caractérisation des exosomes par l’analyse de contenu protéique par l’approche LC-MS/MS et contenu en acides nucléiques (RNA totaux et miRNA) par NGS et qPCR.
  • L’étude de faisabilité préalable

 Origines Exosomales

  • Fluides biologiques (serum/plasma, urine, salive, lait, etc.)
  • Cultures cellulaires
  • Cultures bactériennes

Purification des Exosomes

 Généralités

Les EXOSOMES sont des vésicules extracellulaires (VEs) dont la taille est comprise entre 30 et 130 nm, issues d’un compartiment intracellulaire appelé «endosomes tardifs» et qui sont libérées de la cellule après fusion de corps multi-vésiculaires avec la membrane plasmique. Les exosomes sont produits par toutes les cellules in vivo. Ils sont présents dans tous les fluides biologiques en concentrations variées.

 Notre Expertise

Les fluides biologiques ayant une composition très variable, la purification des exosomes nécessite des opérations d'optimisation spécifiques. Le choix de la technique employée dépend donc des caractéristiques et de l'origine du fluide biologique et de la taille de l’échantillon.

A B

Microscopie électronique en transmission des exosomes dérivés du lait (A) et Stathylococcus aureus (B)

 Domaines d’études

  • Communications cellulaires
  • Réponse immunitaire
  • Diagnostic/biomarqueurs
  • Thérapie anti tumorale
  • Vaccins
  • Inflammation et infections parasitaires, bactériennes
  • Drug delivery
  • Pathologies cardio-vasculaires, cancer, maladies métaboliques.

 Intérêts Techniques

  • Expertise scientifique et expérience technique dans le domaine de vésicules extracellulaires
  • Extrême pureté des exosomes/VEs en conservant un taux de récupération élevé et leur intégrité structurale
  • Absence de co-précipitation des exosomes avec les contaminants (co-agrégats protéiques et organiques)
  • Les préparations sont compatibles avec les travaux sur micro ADN/ARN, protéomique et les études fonctionnelles in vitro ou in vivo.

CTC, Exosome and cfDNA isolation from blood

 Workflow in CTC, Exosome and cfDNA isolation process

 ScreenCell® Technology

ScreenCell® was set-up with the belief that just enumerating Circulating Tumor Cells (CTCs) without easily characterizing them was not enough to allow the early detection of a disease and to potentially follow-up the cancer progression. ScreenCell® has designed and produced a simple but revolutionary technology allowing the fast and effective isolation of CTCs for a better cellular and molecular characterization. Furthermore, extracellular vesicles/exosomes and cfDNA can be collected in parallel to CTC isolation for further purification and analysis of DNA, RNA and proteins.

 DEPArray® single cell isolation

DEPArray® technology allows for the automatic recovery of rare cells from all types of cellular suspensions. Thanks to cell specific fluorescence labeling and morphological criteria, it is possible to select relevant cells including single cells, and to isolate and collect them individually into various supports. The cells may be collected individually or in "pool" from the pre-enriched sample.

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